二維液相色譜儀是將分離機(jī)理不同而又相互獨(dú)立的兩根色普柱串連起來(lái)構(gòu)成的分離系統(tǒng)。樣品經(jīng)過(guò)第一根色譜柱時(shí),通過(guò)濃縮,搜集及后續(xù)的檢測(cè)器進(jìn)行初步分離,然后切換到二根色譜柱中進(jìn)行二步分離。二維分離采用兩種不同的分離機(jī)理分離樣品,即利用樣品的兩種不同特性把復(fù)雜混合物分離成單一組分,這些特性包括分子尺寸、等電性、親水性、疏水性、電荷、特殊分子內(nèi)作用(親和)等,在一維系統(tǒng)中不能*分離的組分可能在二維系統(tǒng)中得到更好的分離。
大多使用兩支或多支色譜柱,并通過(guò)柱結(jié)合技術(shù)實(shí)現(xiàn)樣品的柱間切換。柱切換通常可分為部分和整體切換兩種模式。按切割組分是否直接進(jìn)人二維中,二維分離又可分為離線和在線兩種方式。早期的中心切割技術(shù),大都先在容器中收集一維洗脫產(chǎn)物,再進(jìn)樣到二維中。隨著現(xiàn)代儀器的發(fā)展和適應(yīng)自動(dòng)化分離的需要,目前二維色譜大多采用在線方式,使一維洗脫產(chǎn)物(部分或全部)直接進(jìn)入到第二維柱系統(tǒng)中進(jìn)行分離分析。
部分模式即采用中心切割技術(shù),只使一維分離的部分感興趣的組分進(jìn)入二維中進(jìn)一步分析。為了將樣品有效地轉(zhuǎn)移到下一維柱系統(tǒng)中,須先在一維分離模式中用標(biāo)準(zhǔn)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn),根據(jù)得到的分離信息設(shè)計(jì)切換程序。部分模式不能得到樣品所有組分的信息,此外,還有操作繁瑣、樣品易損失與污染及可能降低分辨率等缺點(diǎn)。
整體模式即全多維液相色譜模式?;贕iddings的理論,一般認(rèn)為全多維分離應(yīng)滿足3個(gè)條件:
(1)樣品的每一部分都受到不同模式的分離;
(2)所有樣品組分以相等的比例轉(zhuǎn)移到二維及檢測(cè)器中;
(3)在一維中已得到的分辨率基本上維持不變。“基本”指通過(guò)測(cè)量全二維中一維軸上的某個(gè)特殊峰所對(duì)應(yīng)的第一維的分辯率與一維情況相比減少不超過(guò)10%。